1 材料 

1.1 儀器 

U3000型HPLC儀，包括二極管陣列檢測(cè)器、四元梯 度泵（美國(guó)Thermo Fisher公司）；AL204型電子分析天平 （美國(guó)Mettler-Toledo公司）；KQ-250型超聲波清洗機(jī)（鞏義予華儀器有限責(zé)任公司）；GC-2014AFSC型GC儀，包 括自動(dòng)進(jìn)樣器、氫火焰離子化檢測(cè)器[島津企業(yè)管理（中 國(guó)）有限公司]。 

1.2 藥品與試劑 

芹菜素對(duì)照品（批號(hào)：111901-201603，純度：99.2％）、 胡椒堿對(duì)照品（批號(hào)：110775-201405，純度：98.9％）、桉 油精對(duì)照品（批號(hào)：110788-201707，純度：100％）均由中 國(guó)食品藥品檢定研究院提供；枯茗醛對(duì)照品[安倍爾實(shí) 驗(yàn)室技術(shù)（上海）有限公司，批號(hào)：R4030004，純度：95％]； 正己烷為分析純，甲醇及其余試劑均為色譜純，水為蒸 餾水。 

1.3 藥材 

白豆蔻（批號(hào)：冀 20100139）、香旱芹（批號(hào)：冀 20100139）、蓽茇（批號(hào)：冀20100139）均購(gòu)于內(nèi)蒙古田里 藥材公司，經(jīng)內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)蒙醫(yī)藥學(xué)院圖門(mén)巴雅爾教 授 鑒 定 分 別 為 姜 科 植 物 白 豆 蔻（Amomum kravanh Pierre ex Gagnep）和爪哇白豆蔻（A. compactum Soland. ex Maton）的果實(shí)、傘形科植物孜然芹（Cuminum cyminum L.）的成熟果實(shí)、胡椒科植物蓽茇（Piper longum L．） 的干燥未成熟或成熟果穗。

2 方法與結(jié)果

色 譜 柱 ：Agilent Eclipse XDB- C18 （250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：甲醇-0.1％磷酸水溶 液；流速：1.0 mL/min；進(jìn)樣量：10 μL；柱溫：30 ℃；檢測(cè) 波長(zhǎng)：225 nm（芹菜素）、342 nm（胡椒堿）。取芹菜素、胡椒堿對(duì)照 品各適量，精密稱(chēng)定，加甲醇制成含芹菜素、胡椒堿質(zhì)量 濃度分別為0.200、1.397 mg/mL的混合對(duì)照品溶液。取上述混合對(duì)照品溶液、供試 品溶液、空白對(duì)照溶液各10 μL，按“2.1.2”項(xiàng)下色譜條件 進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜，詳見(jiàn)圖1。由圖1可知，在混合對(duì) 照品溶液和供試品溶液色譜圖上有相同保留時(shí)間的色 譜峰，理論板數(shù)按芹菜素、胡椒堿計(jì)均不低于 3 000，各 成分分離度均大于1.5，空白對(duì)照對(duì)測(cè)定無(wú)干擾。取“2.1.3”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液 適量，用甲醇依次稀釋 1、2、4、8、16 倍后分別精密吸取 10 μL，按“2.1.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。 以質(zhì)量濃度（x，μg/mL）為橫坐標(biāo)、峰面積（y）為縱坐標(biāo)進(jìn) 行線性回歸，得芹菜素回歸方程為 y＝673.24x+1.212 1 （r＝0.999 6），胡椒堿回歸方程為 y＝1 145.2x+9.370 5 （r＝0.999 9）。結(jié)果表明，芹菜素、胡椒堿分別在12.5～ 200、87.3～139.7 μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

3 討論 

在前期預(yù)試驗(yàn)中，筆者對(duì)芹菜素、胡椒堿在 200～400 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行二極管陣列檢測(cè)，結(jié)果顯示，芹 菜素、胡椒堿分別在225、342 nm波長(zhǎng)處有最大吸收峰， 故選擇225、342 nm分別進(jìn)行檢測(cè)。本課題組前期分別 以甲醇、乙醇、甲醇-25％鹽酸溶液為溶劑制備蘇格木勒3湯水提物供試品溶液，結(jié)果顯示，以甲醇-25％鹽酸溶 液為溶劑時(shí)能很好地保護(hù)醛基，故選擇其作為溶劑；同 時(shí)又考察了超聲提取和回流提取對(duì)提取效果的影響，結(jié) 果發(fā)現(xiàn)，超聲提取時(shí)提取率高、時(shí)間短、溫度低，有效成 分易于分離、純化；此外，還比較了甲醇-水、甲醇-0.1％ 磷酸水溶液、乙腈-水等不同流動(dòng)相系統(tǒng)的分離效果，結(jié) 果顯示，以甲醇-0.1％磷酸水為流動(dòng)相時(shí)，各待測(cè)成分與 其他成分可達(dá)到基線分離，且出峰快、保留時(shí)間短、色譜 峰峰形理想、分離度好，故選擇其作為流動(dòng)相。

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